单细胞测序技术正在革命性地推动我们对生命复杂性的认知，然而其高昂的每样本成本和技术复杂性，限制了其在更多实验室和更广泛物种中的普及。尽管多重样本标记技术能有效“降本增效”，但现有的方法往往受限于抗原鱼类特情人、寡核苷酸表达代价高或操作步骤步骤流程繁多。近日，南方海洋科学与工程广东实验室（广州）的陈凯客座教授公司在Journal of Genetics and Genomics上发表了一项创新性方法学研究，提出了一种名为HEATag的新型样本标记策略，为我们提供了一个节省成本投入、跨外来物种、全手机平台兼容的全新解决方案。

杂志简单

Journal of Genetics and Genomics (JGG)是由我国数学课实验院隐性基因的基因与发育状况微大分子生态学学深入分析所和我国隐性基因的基因学好主办单位的全国学术界界刊物，着力推进于新闻稿一生数学课实验和中医药学隐性基因的基因学邻域的亚无性深入分析课题。JGG 2021年度关系系数7.1，Scopus学术界界刊物如何评价指标英文CiteScore 9.9，位于JCR 2021年度GENETICS & HEREDITY邻域Q1区(Top 10%)，BIOCHEMISTRY & MOLECULAR BIOLOGY邻域Q1区，位于我国数学课实验院刊物系统分区微大分子生态学学类项1区(Top刊物)，隐性基因的基因学和微生物化与大分子微大分子生态学学小类双1区。

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一些 是HEATag

得当的“二三合一”设计构思

HEATag是由凝集素和HUH内切酶形成的容合淀粉酶

「产品定位器」模块图片 - 凝集素

能够识别细胞膜上广泛存在且高度保守的糖基化修饰语（如GlcNAc和Neu5Ac）。

「连入器」模组 - HUH内切酶

可以序列特异性地与普通的、无需化学修饰的单链DNA（ssDNA）检索长条形码查询完成共价联接。

“1+1>2”的效果好：将两者融合，得到的HEATag蛋白既能通过凝集素牢牢锚定在细胞膜上，又能通过HUH蛋白携带特定的DNA条形码进行模板记号与可追溯。

Fig1: HEATag几吨记号关键技术提醒图

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实际验测

HEATag不懈有大多能打？

能够在不同的生活条件下，做到喂乳爬行动物上皮细胞系系单上皮细胞系混样测序

实验室里的设计再精妙，也要经过真实样本的 “实战考验” 才算数。研发创业团队为 HEATag 配置了多轮 “负压测量”，从肿瘤神经细胞系到肿瘤神经细胞，从常温到常温，从新鲜模本到调整模本，全方向查证它的相对稳定义和是真的吗性。

首要轮測試针对性辅乳期动植物癌受损组织系：研发员工取舍了存在人、鼠、仓鼠八个动物群的四种问题癌受损组织（HEK293T、K562、MEF、CHO），在温度下能 HEATag 标记符号后混合式测序。终结再利用的 11447 个癌受损组织中，85.66% 都能能够 HEATag 长条码确切配备到原动物群，子样本间重叠破坏特少，UMAP 聚类介绍介绍更多的是马上证明书，HEATag 长条码与动物群特异形dna组的特征高速保持一致。 之后，检查前提前提先决条件进一大步自动升级：研究分析者试用在 4℃下标出鲜新癌神经元、在高温下标出甲醇放置位置癌神经元，虽然随便标出癌神经元核。的结杲依旧吸睛：每个前提前提先决条件下，模板元素与植物物种消息均有有效的涉及到的性，分拆准确的率超 95%。虽然甲醇放置位置会致使经微的转录本平行的污染，癌神经元核备制有 少许 RNA 泄露，癌神经元方式的引用的结杲依旧与鲜新模板坚持相同，关系证明 HEATag 就能够标出各个操作前提前提先决条件下的实验报告模板。

Fig2: HEATag 可在各种前提下完整单组织转录组混样了解

能符号辅乳期各种動物和浅海无脊柱各种動物的原代内部

若果说团体系测量是 “基础上题”，那团体样板还是 “额外增加题”， 这样的样板一般情况下因团体型号错综复杂、区域融入性专项 ，作为标签技艺的 “突破点”，而 HEATag 正好在这样的 “突破点” 上创造了其优势。

研究团队选择了大鼠和小鼠的睾丸聚集，这类样本包含精原干细胞、精母细胞、精子细胞等多种类型，对标记一致性的要求极高。实验中，两种动物的睾丸用特异性 HEATag 条形码标记后混合测序，最终获得的 14663 个细胞不止能被最准确差别，所以最主要的生殖细胞类的聚类分析后果都明晰可辨。

更令人惊喜的是HEATag对海洋能菌物的适用性。HEATag能在海水的等渗溶液中标记新鲜的海洋动物细胞（如海月水母、大西洋海刺水母）。研究人员用人工海水稀释的HEATag 标记了水母和珊瑚的组织细胞后在 BD Rhapsody 平台测序，最终回收的 6452 个细胞中，HEATag 条型码与种类转录组具备有较高相同性，不会突然出现因高盐周围环境使得的 “标示无效”。后续对甲醇固定的海洋生物细胞测试结果显示，HEATag 在固定样本中的拆分效果优于新鲜样本。

Fig3: HEATag 可保证 喂母乳动物界团体子样本许多 scRNA-seq 具体分析

Fig4: HEATag可实行新鲜的浅海无脊椎神经爬行动物多沉 scRNA-seq 深入分析

HEATag与神经细胞的切合也不会激发转录组的可观改变了

对样本标记技术来说，“不影响样本本身的 RNA 特征” 是底线。研究团队将来自同一供体的等量的 HEATag 标记细胞与未标记细胞混合测序，对比两者的 RNA 质量、基因捕获数量和细胞组成。结果显示，标记组与未标记组的 RNA 质量没有明显差异，捕获的基因数量基本持平，UMAP 图谱显示两组样本的细胞组成高度相似，转录相似性更是维持在高位。无论是细胞簇的注释结果，还是不同细胞类型的基因回收数量，两组都几乎一致，没有出现 “标记导致的基因表达异常”。这意味着，HEATag在完整标出任务卡的同一时间，没对后期的转录成分析构成骚扰，担保了论述数据显示的逼真性。

Fig5: HEATag不能作用模板的 RNA 形容机制

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末来可期

HEATag 能为单神经细胞分析所带来些什么？

HEATag 的总价值，远不仅于 “来解决箭头事情”，它的轻松性和普遍性，就在为单受损细胞分析打开浏览器许多应该性

从广泛应用情境看到

HEATag 能履盖从 “非常简单非常深入分析”（如癌安排与很正常安排、口服药物净化处理与比）到 “大面积科学研究”（如安排细胞系膜图谱制图、高通芯片量使用需求）的全比率使用需求。现在 PIP-seq、Stereo-cell 等新式的可经济发展技術的经济发展，HEATag 还能进第一步提拔单细胞系膜科学研究的通量，注力科学研究团对深入推进很大面积的工程项目。

从跨方面价值看来

HEATag 一方面适于于转录组学，还能与表观基因组组学、蛋清质组学、房间组学等技術紧密结合，进行设计检索和寡核苷酸编码序列，HEATag 都行解乏渗透到差异的组学方案，不影晌卫星信号捕捉到长度。一起，应用于HEATag还都行发展壮大单受损细胞糖组学研究探讨技術。

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媒体合作新动态

拜谱动物与陈凯老师达到目标基本配合相关

比较适合瞩目的是，在 HEATag 方法显流露出巨型应运方面优势的题材下，拜谱生态学的科技已与我国南方浮游生态学地理学与施工江苏科学试验室（成都）陈凯院士完成率阶段性战略合作想法。对方计划方案紧扣 HEATag 方法的品牌化落实、科技教学科研导出等趋势展开图深度1分工协作，促进改革这一个低总成本、跨种类的单神经元标志方法迅速应运方面于实际的科技教学科研场所，为更大科学试验室供给高质量、经济性的单神经元教学科研设备，电子助力科技教学科研运写作者在神经元生态学的科技学、浮游生态学生态学的科技学、重大疾病缘由等方面要先拿到更大提升